平板劃線接種法為最常用的分離培養(yǎng)細(xì)菌的方法，通過平板劃線后，可使細(xì)菌分散生長，形成單個(gè)菌落，有利于從含有多種細(xì)菌的標(biāo)本中分離出目的菌。平板分離劃線的方法較多，其中以分區(qū)劃線法與曲線劃線法較為常用。其目的都要使細(xì)菌呈現(xiàn)單個(gè)菌落生長，便于同雜菌菌落鑒別。現(xiàn)只介紹分區(qū)劃線法：

1、右手持接種環(huán)，經(jīng)火焰滅菌，待涼后，挑取大腸桿菌（或葡萄球菌）培養(yǎng)物少許。

2、左手斜持瓊脂平板，皿蓋留在桌上，于火焰近處將菌涂于瓊脂平板上端，來回劃線，涂成薄膜（約占平板總表面積的1/10），劃線時(shí)接種環(huán)與平板表面成30~40º角，輕輕接觸，以腕力在平板表面行輕快地滑移動作，接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面。

3、燒灼接種環(huán)，殺滅環(huán)上殘留細(xì)菌，待冷（是否冷卻，可先在培養(yǎng)基邊緣處試觸，若瓊脂溶化，表示未涼，稍等再試），從薄膜處取菌作連續(xù)平行劃線，約占平板表面1/5左右，再次燒灼接種環(huán)，等三次平行劃線……以同樣方法作第四次，第五次劃線，將平板表面劃完。

4、劃線完畢，蓋上平皿蓋，底面向上，用標(biāo)簽或臘筆注明菌名檢驗(yàn)號碼，接種者信息等，置37℃孵育培養(yǎng)24小時(shí)后觀察結(jié)果。